下面介绍乳酸菌的检测方法——倾注法并产生透明圈的检测方法的原理，和操作技术

    针对用户大多数并不是微生物专业人员，编写本文时，特意使用浅显易懂的文字进行描述；

一. 本检测方法的原理

1.1 检测过程简述

① 乳酸菌悬液的制备

    将待检测的样品，准确称取0.5克，量取99.5mL无菌生理盐水稀释，（此次稀释了200倍，即0.5克样品，稀释到了100克水溶液），再加入灭菌玻璃珠20～30粒，于250mL三角瓶中，置于振荡器或摇床上剧烈摇晃30分钟以上，目的是将粘连在一起的乳酸菌细胞打散，分散开来。

② 稀释到适当倍数

    根据所待检测的样品可能的乳酸菌含量，进行适当的稀释操作，例如如果估计样品的含乳酸菌活菌数为200亿/克左右，则建议稀释2亿倍，这样将来在90mm平板上培养时，会长出大约100个乳酸菌落，比较便于计数，总之，控制平板培养皿上的乳酸菌落数量在30～300个的范围内，比较便于计数。

    我公司“强微”牌乳酸粪肠球菌系列产品，含乳酸菌活菌数的分析保证值均在100～300亿/克范围内（刚出厂的则在240--720亿/克以上），所以，建议稀释2--3亿倍以上即可。

    稀释方法用无菌生理盐水，在250mL三角瓶中进行稀释，方法见后述。

③ 倒制平板，即接种

    倒制平板在超净工作台上进行，养殖户可使用一盏简单的酒精灯和一个干净的操作台就可操作；

    即事先配制好，并灭菌处理的检测用琼脂培养基，在水浴锅内保持50℃的温度，使琼脂培养基呈溶解状态，置于操作台旁边备用；（养殖户可先不从压力锅中取出，在压力锅维持一定的温度，从而也不会凝固）

    取事先干热灭菌处理后的90mm培养皿（也叫平板）若干、1mL移液管若干，置于操作台上备用；（养殖户的培养皿平板可在压力锅中进行蒸汽灭菌处理）

    在无菌条件下（打开超净工作台无菌风，或养殖户点上酒精灯），将稀释了2亿倍的乳酸菌液，用移液管移取1mL ，于培养皿中，再在此培养皿中倒入前述保持溶解状态的检测培养基液15mL左右（倒培养基时，估计能覆盖满平皿的液体量即可），然后，盖好培养皿盖，轻轻转动平皿，原地转几圈，使培养基液与乳酸菌液混合均匀，等数分钟后，待培养基凝固后，可移入培养箱中进行培养；

④ 培养箱中进行培养

    将前面倒制好的平板，倒转（即盖子在下面），放于培养箱中，于33℃温度下，培养2～3天，待培养皿平板中长出比较明显的，带有透明圈的菌落时，即可进行计数，得出检测结果。

1.2 检测的原理介绍

   本文介绍的乳酸菌检测方法，是我公司用来检测乳酸粪肠球菌的专利技术之一，检测乳酸菌的培养基配方如下：

    用于检测乳酸菌的培养基配方为：蛋白胨15g，牛肉膏5g，葡萄糖20g，氯化钠5g，碳酸钙10g，琼脂粉10g，水1000ml，115～121℃灭菌20min，灭菌后放置水浴50℃保温备用。

    可以看到，与普通的琼脂培养基配方有两个比较明显的区别：

    ① 其中琼脂的用量只有1%，比常规琼脂培养基的2%用量少了一半，目的是降低琼脂凝固温度，为了在倒制平板时，使培养基能在较低的温度下与热敏性的乳酸菌混合，并一直呈溶解状态，混合均匀后，才慢慢凝固；

    ② 同时，添加了1%的碳酸钙，由于碳酸钙难溶于水，所以，加入碳酸钙后的琼脂平板培养基为混浊状态，为的是在将来培养乳酸菌时，乳酸菌在培养过程中产生乳酸，把菌落周围的难溶性的碳酸钙溶解，成为可溶性的乳酸钙，并使菌落周围的培养基变得透明，在菌落周围产生透明圈，从而判断其为乳酸菌。