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光合细菌的活菌计数和纯种分离技术
2007/5/31 14:05:52   文章来源:原创   浏览次数:41263
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一、采用琼脂固体培养基涂抹培养计数分离法
　　条件：无菌室、过滤空气鼓风工作台、平皿、接种针、固体培养基、液体培养基、密封玻璃试管、高压锅、加热器、培养箱等。
　　步骤：（在无菌室内操作）
　　1.将适量琼脂固体培养基高压蒸煮(120℃)20分钟后，倒入若干个平皿冷却到45℃以下，制成固体培养基待用。
　　2.取待测光合细菌菌液，分别用蒸馏水以10万倍、50万倍、100万倍、500万倍、5000万倍、10000万倍 稀释。
　　3.分别从每个稀释倍液中取1毫升的样本各10个，均匀涂布于贴好相应标签的平皿内固体琼脂培养基平面上。宜春专利中心提供光合细菌发生剂。
　　4.将平皿放入培养箱培养12-50个小时，如菌落未长成，再继续培养，直到有明显的菌落长成为止。
　　5.各种菌的菌落颜色、形状各不相同，根据光合细菌菌落特征，找出光合细菌菌落，并计数。取同稀释倍液10个样本菌落的平均数，乘以它的稀释倍数，即可大约得出待测菌液每毫升含光合细菌的活菌数。取各稀释倍液算出的每毫升含光合细菌活菌的平均数，即可较为准确地检测出该待测菌液的浓度。实际操作并不如此简单，因为菌落有杂菌和光合菌交错在一起的，也有两个以上光合细菌菌落合在一起的，很难分辨计数。
　　6.用接种针将光合细菌菌落挑出，用适量蒸馏水稀释后，再涂布于固体培养基平面上，进行培养，待光合细菌在培养基上再次长成菌落后，在鼓风工作台内用接种针挑出，接入盛有经高压蒸煮灭活过液体培养基的试管内，进行密封厌氧培养，培养好的光合细菌就是纯菌种。
　　纯菌种的分离是专业性很强的一门技术，只有专业人员，且经验丰富的，才能识别各种菌落，从中分离出有用的菌株。
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