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用弧菌藻毒净控制弧菌实践中的TCBS检测误区

2019/1/31 10:10:47   文章来源:强微生物科技   浏览次数:49277
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   常常有用户说,用了我们弧菌藻毒净等产品3天后,说明书上说是抑制弧菌和链球菌的,使用3天后,水体中会基本检测不到弧菌,但为什么用过后,用TCBS培养基来检测发现绿色的弧菌消失了,但却发现黄弧菌落增加了很多,最终结果证明,那个黄色菌落是乳酸菌造成(是乳酸菌菌落),并不是真正的黄弧菌,具体解释如下:

    1.弧菌藻毒净产品主要以固态发酵工艺培养的粪肠球菌为主,固态发酵培养乳酸菌技术是强微获得2014年国家创新基金的专项技术,能以固态培养方式,得到300亿/克含量以上的乳酸菌活菌,固态培养的乳酸菌的特点是:1.活力高,在水中可以迅速适应和繁殖;2.本身是分解粪便类的乳酸菌,粪肠球菌是从动物后肠和粪便中提取出来的乳酸菌,可迅速帮助改善水质,分解粪便和有机碎屑;3.第三就是比较强烈的抑制水体中的弧菌和链球菌。
    2.即使是乳酸菌(乳酸菌在自然界中有几百种 ,乳酸菌这个名字只是一个统称),也必须是粪肠球菌为主的产品,对弧菌和链球菌才有效,而象植物乳杆菌,嗜酸乳杆菌,则效果甚微;
    3.必须达到较高的使用量,才能有抑制弧菌和链球菌的效果,即必须达到相对优势的菌群才有效,这个量就是每立方米水体中投入乳酸菌至少50亿个乳酵菌才有效,而用弧菌藻毒净一包一 亩的话,可达到224亿/毫升,因为弧菌藻毒净的粪肠球菌含量是300亿/克,一包500克即150000亿/为,一亩一米水深的话是667立方米,相除后得到224亿/立方米,所以,一般要完全抑制弧菌的话,一包1-2亩都是可以的;

    使用我们的弧菌藻毒净,每25天使用一次,基本上可以保证乳酸菌在水体中的绝对优势并保持25-40天优势,保证没有弧菌发生;紧急情况下使用弧菌藻毒净一次;

   关于用TCBS培养基检测弧菌中,很多用户用了弧菌藻毒净后检测,发现绿弧菌是没有了,黄弧菌却比之前还更多,甚至是密密麻麻的存在,但这里要说清楚的是,平板上培养出来的黄弧菌,并不是真正的黄弧菌,而恰恰正是我们的乳酸菌(粪肠球菌);
    这里完全是一个误会,因为直接用我们的弧菌藻毒净产品去这个TCBS培养基上划线检测的话,长出来的就是黄色的菌落,全部都会被错认为是黄弧菌,但公司不可能专门去生产黄弧菌呵,这就是乳酸菌而已,因为TCBS培养基的原理是:使用胆酸盐和牛胆汁粉来抑制革兰氏阳性菌(乳酸菌是革兰氏阳性菌),以溴麝香草酚兰和麝香草酚兰为pH指示剂,变色范围pH6.0(黄)~7.6(蓝绿),以蔗糖为碳源,通过发酵培养反应造成PH的变化(降低),从而促使溴麝香草酚兰显出不同的颜色(黄色);
     现在问题来了,强微公司产品中的乳酸菌活力强,是耐胆盐耐胆酸的,且可发酵蔗糖,产酸能力很强,能把TCBS培养的PH降低到5以下,所以,培养后呈黄色,让人们误以为是致病性弧菌(如溶藻弧菌,或霍乱弧菌,哈维氏弧菌),建议您此时取黄色菌落于高倍显微镜下进行观察,呈圆形的为我们的乳酸粪肠球菌、屎肠球菌,呈弧形或逗点状的才是致病性弧菌;或进行革兰氏染色试验,因为弧菌是革兰氏染色阴性菌,而乳酸菌是革兰氏染色阳性菌,这样也可以区别开来。
     然后又有人要问了,特别是我们遇到一家对虾育苗场的技术总监不断追问,他说他们用了国内两家公司的乳酸菌产品,而且是比较知名的公司的乳酸菌产品,在TCBS培养基上都没有这个现象,为什么就你们公司的乳酸菌有这个变黄菌落的现象呢,这让我真的无言以对,只好向他索取那两家公司的样品,拿回来检测一看,这两家公司的乳酸菌含量都严重不足,且远远低于这两家公司标注的分析保证值,继续试验后证明,这两家公司的乳酸菌也不耐胆酸盐(这样在TCBS培养基上就根本长不出来),所以,很显然,这就解释了为什么这两家公司的乳酸菌在TCBS培养基长不出来(自然也就没有黄色菌落了),而为什么我公司的乳酸菌可以在TCBS培养基上长出黄菌落来(因为我们的乳酸菌是耐胆酸盐的,活力很强),我向这个技术总监解释了此事,他也承认我们的产品解决了困扰他的氨氮和亚盐超标问题,对虾苗也一直非常良好,各项指标都不错;但最终仍然因为害怕或别的原因或沟通不畅等原因,而不接受我们的产品。
     以上是我们公司在推广产品中遇到的最头痛的问题,造成了极大的误解误会;例如在TCBS培养基上检测,因为用了我们的乳酸菌产品,黄色菌落增加是肯定的结果;

   用TCBS培养基检测弧菌中的注意事项:
    国家检测副溶血弧菌(绿弧菌)的标准GB4789.7-2013中明确规定:必须在培养18~24小时以内观察有无绿色菌落,否则会受杂菌影响而判断无效,所以这一点也需要注意,一定要在24小时以内观察的才有效,超过24小时的,不管是变黄还是变绿,都是无效判断,因为超过24小时后,随着杂菌的进入,会造成培养基中代谢产物的成分变化巨大,并从而产生各种颜色,包括变成绿色都有可能,从而造成可能误会为绿弧菌,所以,国家标准规定,必须在24小时以内观察的才有效。

    另外,我们在广东湛江有一个对虾养殖大户,用了我们的弧菌藻毒净之后,他说弧菌检测不到了,产品效果非常好,我们马上就此事联系到他,想了解是否还有其他的检测弧菌的方法,以避开TCBS培养基的误会,哪知道,他也是用TCBS培养基来检测弧菌的,只是他说,他不在乎黄弧菌,他在乎的是绿弧菌,他说,黄弧菌不可怕,怕的是绿弧菌,如果一旦有绿弧菌出现,则对虾肯定会出问题,用了强微公司的弧菌藻毒净之后,基本上检测不到绿弧菌了,他的对虾也生长良好,从未出过事;
    以下是他发来的检测图:(使用产品后黄色菌增加,但主要是耐胆酸盐的乳酸菌形成的黄色菌落,在黑暗下不会发光)

使用产品之前则有绿弧菌,如下图

使用弧菌藻毒净后,没有了绿色的菌落了,但黄色的菌落仍然存在,如下图

 

    我公司技术部做的TCBS培养乳酸菌试验,从图可以看到,变黄的区域PH很低,而没有变黄的区域PH较高,但由于存放时间有5天了,所以,也有杂菌菌落存在,并不是绿弧菌

直接用我们的乳酸菌划线的TCBS培养结果

您也可以在显微镜下观察,在1000倍以上的显微镜下观察乳酸粪肠球菌和屎肠球菌,是球形的,如下图

而弧菌是弧形的,或逗点状的;如下图

 



 


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