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1、钟老师，你好！我是强微产品的忠实用户，前几天在官网上看到有养殖户提问：用MRS培养基扩培强微乳酸菌的问题。自己再网上购买了MRS培养基的材料，进行少量扩培，并和用水产苷+红糖扩培的进行比较，有些困惑想请老师解答。

     扩培过程如下：
     5月25日20:00开始扩培，用的是5L的密封塑料桶，桶1用的是MRS培养基，桶2用的是水产苷+红糖作为培养基，菌粉都是壮肠100，温度在30-35之间.
     5月26日10:00开瓶测试PH值，桶1是5.3，桶1内有大量气体，感觉要把瓶盖顶起来了，打开瓶盖时有大量泡沫溢出；桶2PH为4.1，瓶内气体较1桶要少些。
     5月27日7:00桶1ph5.3，桶2ph值4；
     5月28日8:00桶1ph5.3，桶2ph3.6；
    请问钟老师：1.按照咱普通养殖户判断乳酸菌是否扩培好的标准主要是看PH，味道，是否说明桶1扩培失败呢？（因为目前没有显微镜也无法在显微镜下观察）为什么用营养丰富的培养基扩培的反而要差些？（所购买的培养基成分都是比较贵的纯度AR的，应该不会有假）
    2.扩培期间桶内的气体是否要放出？如果不放出会不会把瓶撑爆？但是放出气体后会不会有杂菌混入导致扩培失败？
    3.您在回答上个养殖户提的问题时说过“ 四是滴加小苏打溶液，原理是乳酸菌发酵产酸，而PH达到5以下后，会慢慢抑制乳酸菌自己的繁殖，Ph达到4以下时，几乎可以完全抑制乳酸菌繁殖，所以，您必须在发酵12小时后，或每12小时左右，滴加一次小苏打粉，添加量为发酵液量的0.3%左右，或自己用PH计检测一下PH，提高PH到5.5以上。”我的桶1PH扩培12小时后就一直在5.3左右，是不是说明菌还在繁殖需要继续等待呢？
    希望钟老师百忙之中帮忙回答下，谢谢！

     您好，MRS培养基是能培养绝大多数乳酸菌的培养基，并主要是指在厌氧培养状态下对乳酸菌有一定的选择性，这个培养基中氮源是非常丰富的，氮源营养中的蛋白胨、牛肉膏和酵母膏等用量达到2%之多，而作为碳源的葡萄糖等用量也仅仅是2%，所以，它是侧重于繁殖生长，MRS培养基但必须灭菌处理，因为氮源太丰富，养殖户用MRS培养基则可能会造成杂菌多，在我的回答那个养殖户问题时，我确实缺乏仔细思考这个问题，确实只是顺口一说，非常抱歉，现在看了您的提问，我仔细考虑了一下，它确实不太适合养殖户朋友扩培；

     对于养殖户来说，还是建议用红糖5-7%和强微水产苷0.5%来扩培，例如壮肠QW100（育苗专用菌）250克，红糖20公斤，强微水产苷1.5公斤，水300公斤左右，我们推荐给养殖户的水产苷用量只是250克，但也是为了成本考虑，养殖户也没有必要用那么高的水产苷，只加250克的水产苷作为氮源和细菌生长因子源，也是足够培养出至少1亿/毫升的含菌，且PH下降得快，可以有效抑制杂菌的生长（低PH首先抑制其他杂菌），一亩泼洒5公斤以上也是足够作为平时维护池塘水体乳酸菌用的了
     如果泼洒20-40公斤/亩，则可以完全抑制池塘水中的弧菌用的了；很显然，您的目的是想扩培出相对专业的“乳酸菌扩培液”产品，这样建议您用水产苷多一些，多增加一些氮源，即以上推荐的配方，比MRS培养基的碳氮比要高出5倍以上，这有利于不灭菌的粗放扩培
      养殖户的这种扩培配方：即“强微壮肠QW100”250克，红糖20公斤，“强微水产苷”250克，水300公斤，来扩培“乳酸菌扩培液”，PH下降是非常快的；甚至可以建议您充气培养，不要紧的，充气18小时以上就达到繁殖顶峰了（要求水温25度左右），只需要每500公斤一个曝气头充气培养24小时，如果是海水则最好充气48小时或更长一些（因为有一个在海水中驯化的过程），充气扩培的“乳酸菌扩培液”，里面至少有乳酸菌5-15亿/毫升左右，培养的效率要高得多，碳源是能量保证繁殖和代谢所需要的能量和构成细胞的碳骨架，氮源则成为提高活菌含量的限制性因子，但对养殖户来说，又不能用太多的氮源，以免杂菌多，对养殖户来说，还是要有一定的碳氮比高度，要比较高的碳氮比，这样可以有较大一部分碳源转化成乳酸有机酸，来降低PH值，保证乳酸菌的纯净，防止杂菌等；

    这就比较好解释您的发酵出来的现象了，用MRS培养的PH的下降是有限的，因为它形成乳酸有机酸的碳源有限，您的试验也有可能污染了杂菌，您可以通过闻气味来初步判断一下，酸香味是正常的，如果有不愉快的气味，则可能有杂菌，最好是用显微镜观察一下，我们的壮肠QW100（育苗专用菌）主要以粪肠球菌（乳酸菌的一种）为主，观察是球形菌，成双成对的比较多；

    而您用红糖+水产苷的试验中，估计您的水产苷也只用250克吧，这个对普通养殖户来说是足够了，PH会下降得比较快，您也看到了，PH在14小时就降到了4.1，在35小时时为4，在58小时时降到了3.6；而用MRS培养基的从14小时后一直是5.3（可能杂菌也比较多了）；

     普通的养殖户判断乳酸菌扩培是否成功，一是看PH，降到4.4以下就算是比较好的了，也是比较纯净的了，杂菌也不会过多；二是闻气味，是一种酸香味的，比较愉快的气味，但凡不愉快的异味，都是有杂菌，当然，有一些是因为时间太长，乳酸菌自溶死亡后产生的臭味，也是正常的，如果一直没有用完，保存的时间比较久，如1个月以上，有臭味了但PH在4左右或以下的，也是正常的可以用的，可以泼洒的，只是乳酸菌死亡自溶的气味，仍然有一定的活菌，但活菌估计不到0.1亿/毫升，仍然可以用，代谢产物和乳酸菌自溶产物，也是藻类的营养，也可给水体提供菌相营养；

     发酵产生的气体可让它自然挥发掉，您不要密封太死，如果是带盖子的，旋盖的就要留一圈不要旋死，如果是用塑料膜扎的，则自然可以走气的，不用管它；发酵容器中一直是保持正压状态，杂菌进不了的；

     滴加小苏打粉或烧碱液，那是专业乳酸菌生产厂家在专业化发酵罐上的技术，不太适合养殖户，因为养殖户如果滴加小苏打，不断中和发酵产生的有机酸，提高PH，以促进乳酸菌繁殖，则杂菌是喜欢高PH值的，则可能就会大量污染杂菌了，所以，不建议滴加小苏打粉；除非您是扩培24-48小时后，并控制在3-5天内就全部泼洒到池塘中，不保存，及时的用完到池塘中，则就可以采用；

     您的最后一个问题，采用MRS培养基的PH一直在5.3，并不意味着一直在繁殖，或许可能是杂菌多了，杂菌可能产碱，保持PH不下降，毕竟营养这么丰富的培养基，杂菌也喜欢，特别是我们养殖户是不灭菌培养的，所以，目前无法判断您的MRS培养是否成功，但如前所述，您可以闻气味，现在才58小时，如果气味异常或难闻，肯定是有杂菌，就失败了不能用了；

     最后说一句，建议您充气扩培，充气时间最多24小时，PH也会下降到4.5以下，杂菌很少，然后要么马上泼洒到池塘中，要么就是密封好保存，并最好在10天以内用完到池塘中去，因为充气培养是最有效的繁殖方法，大量繁殖的结果是迅速消耗了糖份和营养，所以，保存期减少到10天以内要用完，而不充气培养的可以最多保存30天用完，因为不充气培养的，其中的营养是慢慢消耗的，保存时间会长一些；

    乳酸菌是兼性厌氧菌，在有氧条件下是大量繁殖，在无氧条件下是缓慢繁殖，有氧或无氧条件下的不同，是对能量（葡萄糖）利用效率的不同，有氧条件下是通过氧化磷酸化进程获得能量ATP，所以，繁殖效率非常高非常快，工业化生产粪肠球菌也是充气培养的，无氧条件下适合于养殖户用来扩培乳酸菌，一是有害细菌不喜欢厌氧条件，二是厌氧产酸多PH下降快，也是可以选择性抑制有害细菌的，所以，无氧或厌氧培养是养殖户的普遍采用的方法，毕竟养殖户不可能灭菌培养的；当然，如前所述，您也可以充气扩培，只是要控制充气的时间24-48小时内，并及时用完，也是杂菌可控的；
    养殖户“乳酸菌扩培液”的制作看这里：http://www.qw99cn.com/show.asp?newsid=6174

    专业一点的则建议水产苷用量达到1.5公斤并建议充气培养，可以培养出比文章中推荐的250克水产苷添加量的，要大5倍多的乳酸菌活菌含量；